دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120609Physiological and metabolic responses in rice under salt stressپاسخ های فیزیولوژیکی و متابولیکی گیاه برنج تحت شرایط تنش شوری114170FAآمنه ساداتهاشمیدانشجوی دکتری دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری، گروه زراعت و اصلاح نباتات. مازندران، ساری، کیلومتر 9 جاده دریا، صندوق پستی 578قربانعلینعمت زادههیئت علمی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری و رئیس پژوهشکده ژنتیک و زیست فناوری طبرستان0000-0002-1371-0293قاسمحسینی سالکدههیئت علمی موسسه تحقیقات بیوتکنولوژی کشاورزی کرج و ریاست بخش ژنومیکسسید عبدالهحسینیدانشجومحمد رضاحاجی رضاییموسسه تحقیقات کشاورزی IPK, GaterslebenJournal Article20120331Two rice lines, IR29 and FL478, which differed in salinity tolerance, were investigated for physiological and metabolic responsesدو ژنوتیپ برنج IR29 و FL478با حساسیت های متفاوت به شوری تحت تنش شوری با 100 میلی مولار NaCl برای پاسخ های فیزیولوژیکی و متابولیکی مورد بررسی قرار گرفتند. به این ترتیب وزن خشک، وزن تر و طول ریشه و اندام هوایی گیاهان و همچنین میزان یون های سدیم و پتاسیم، مقدار اسید های آمینه و برخی قند ها و قند- الکل ها در ریشه و اندام هوایی گیاهان در شرایط کنترل و تنش ارزیابی شدند. بعد از 12 روز از تنش، سطح یون سدیم بخصوص در اندام هوایی IR29 افزایش معنی داری داشت در حالیکه یون پتاسیم بیشترین افزایش را در ژنوتیپ FL478 نشان داد. از طرف دیگر تغییرات متابولیکی در پاسخ به تنش های شوری در بین دو ژنوتیپ متفاوت بود، یعنی گیاهان IR29 در مقایسه با FL478 بیشترین سطح تغییرات را در اسید های آمینه بخصوص آسپارژین، گلوتامین، پرولین و GABA نشان دادند، این امر می تواند نشانگر خسارت و پیری سلول ها در گیاه حساس باشند، در حالی که قند ها و قند- الکل ها که به عنوان مواد محافظتی در سلول، تحت شرایط تنش در هر دو ژنوتیپ افزایش یافت، اما مقدار آن ها در ژنوتیپ متحمل FL478 بیشتر بود. این نتایج نشان می دهد که تفاوت های مشاهده شده در بین دو ژنوتیپ در پاسخ به تنش شوری ممکن است تا حدوی به تفاوت های مشاهده شده در سطح متابولیت ها نسبت داده شود.دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120531Study of genetic variation in Iranian rice (Oryza sativa L.) varieties using by molecular markers linked with drought resistance genes.بررسی تنوع ژنتیکی ارقام برنج ایرانی با استفاده از نشانگرهای ریزماهواره پیوسته با ژن های مقاومت به خشکی1525169FAرضاامینی نسبکارشناس صندوق بیمه محصولات کشاورزی0009-0000-8219-4432محمد علیابراهیمیعضو هیئت علمی دانشگاه پیام نور تهرانعلی اکبرعبادیعضو هیئت علمی موسسه تحقیقات برنج کشور0000-0003-1344-5810محسنقدسیمربی پژوهشی موسسه تحقیقات برنج کشورJournal Article20120329The study was designed to characterized the genetic diversity within subset of 20 Iranians rice (Oryza sativa L.) varieties using 19 microsatellite markers linked to genes controlling drought tolerance. Also drought resistance index as an important integrative trait in maturity stage was evaluated in 20 varieties in two environments (stress and non stress). Results of combined analysis showed significant differences (چکیده<br />این تحقیق به منظور بررسی تنوع ژنتیکی مجموعه ای از 20 رقم برنج ایرانی، با استفاده از 19 نشانگر ریز ماهواره پیوسته با ژنهای کنترلکننده تحمل به خشکی، انجام گرفت. همچنین شاخص مقاومت به خشکی به عنوان یک صفت تکمیلی مهم در مرحله رسیدگی دانه در 20 رقم و دو محیط (تحت تنش و بدون تنش) ، مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج تجزیه واریانس مرکب نشان داد که بین ژنوتیپها از لحاظ صفت شاخص مقاومت به خشکی، اختلاف معنیداری (در سطح احتمال یک درصد) وجود داشته و اثر محیط نیز بر شاخص مقاومت به خشکی در سطح احتمال یک درصد معنیدار بود. بر اساس نتایج آزمایش حاضر رقمهای سنگجو ، خزر و لاین 831 بیشترین پایداری عملکرد و ویژگیهای فیزیولوژیکی را در برابر تنش کمبود آب نشان دادند. همه 19 نشانگر ریز ماهواره در 20 ژنوتیپ مورد مطالعه چند شکلی نشان دادند. در مجموع 142 آلل با میانگین 47/7 آلل در هر جایگاه ژنی مشاهده شد. نشانگر RM166 دارای بیشترین تعداد آلل(11آلل) و نشانگرهای RM152 و RM555 دارای کمترین تعداد آلل (5آلل) بودند. همچنین میانگین PIC نیز 817/0 برآورد شد که نشانگر RM166 با PIC 89/0 بیبشترین و RM152 با PIC 7/0 کمترین PIC را نشان داد. محاسبه شباهت ژنتیکی بین دادههای مولکولی توسط ضریب تشابه Jacardو الگوریتم UPGMA، ژنوتیپها را به 6دسته تقسیم کرد. تجزیه به مختصات اصلی به نحوی تأیید کننده گروه بندی تجزیه خوشه ای ژنوتیپ ها بود. تمامی نشانگر های ریزماهواره مورد استفاده در این تحقیق تنوع ژنتیکی بین ارقام برنج ایرانی را نشان دادند.دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120531Evaluation the expression pattern of AlSOS1 and AlNHX genes under NaCl stress
In halophyte grass Aeluropus littoralis Parl.بررسی بیان ژن های AlSOS1 و AlNHX در گیاه هالوفیت Aeluropus littoralis Parl. تحت تنش کلرید سدیم2737171FAولی الهقاسمی عمراندانشگاه فردوسی مشهدعبدالرضاباقریدانشگاه فردوسی مشهد، دانشکده کشاورزیقربانعلینعمت زادهدانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی ساری0000-0002-1371-0293امینمیر شمسیدانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسینادعلیبابائیان جلودارعضو هیات علمی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساریJournal Article20120320Salinity, predominantly NaCl, limits plant growth and impairs agricultural productivity. In higher plants, Na+ efflux and compartmentalization are achieved by Na+/H+ antiporters located in both the plasma and vacuolar membranes. Here we investigated the expression pattern of the genes AlNHX and AlSOS1 under 250 mM NaCl treatment after 6h and 1, 3, 8 and 17 days time intervals by Real Time-PCR technique. The transcript levels of AlNHX and al AlSOS1 were up-regulated by salt stress in all tissues. The AlSOS1 expression remarkably increased in leaves after 6 h and the AlNHX transcript abundance reached to the maximum level after 24 h. In node and internode tissues the transcript levels of AlNHX and AlSOS1 increased sharply 24 h after salt treatment and then gradually decreased within 3 and 8 days and finally after 17 days reached to a steady-state in which the mRNA content was similar to that of control plants. The transcript abundance of both genes in roots slightly increased Upon salt treatment and after 3 days reached to their maximum levels and this expression continued until 8 days and then decreased to a basal expression similar to control for AlNHX gene but in AlSOS1 decreased to reach a new steady-state in which the mRNA content was about 2-fold that of control plants.شوری و به طور عمده کلرید سدیم، از رشد گیاهان جلوگیری نموده و سبب کاهش تولیدات کشاورزی میگردد. در گیاهان عالی دفع و حجره بندی سدیم بواسطه آنتی پورترهای موجود در غشاهای پلاسمایی و واکوئلی انجام می شود. در این مطالعه، الگوی بیان ژنهای AlNHX و AlSOS1 در پاسخ به تیمار شوری 250 میلی مولار کلرید سدیم در زمان های 6 ساعت، 1، 3، 8 و 17 روز پس از اعمال تنش با استفاده از تکنیک Real Time-PCR در گیاه Auleropus مورد بررسی قرار گرفت. سطوح نسخه برداری دو ژن در پاسخ به تنش در همه بافت ها افزایش یافت. بیان ژن AlSOS1 در بافت برگ پس از 6 ساعت افزایش یافت و بیان ژنAlNHX پس از 24 ساعت از اعمال تنش به بالاترین میزان خود رسید. در بافت گره و میانگره سطوح نسخه برداری هر دو ژن، 24 ساعت پس از اعمال تنش به شدت افزایش یافت و سپس در 3 و 8 روز بعد از اعمال تنش به تدریج کاهش یافت تا در نهایت 17 روز پس از تنش به حالت پایدار برابر با شاهد(بدون تنش)بازگشت. میزان بیان هر دو ژن در بافت های ریشه به آهستگی بعد از اعمال تنش افزایش یافت و پس از 3 روز به میزان حداکثر رسید و این میزان بیان تا 8 روز پس از تنش ادامه یافت و در ژن AlNHX پس از 17 روز به حالت پایدار برابر با شاهد بازگشت، در حالی که در مورد ژن AlSOS1 پس از 17 روز همچنان بیان دو برابر شاهد بوددانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120430Floral dip Transformation of EXPA1 to Arabidopsis thalianaانتقال ژن EXPA1 به گیاه آرابیدوپسیس تالیانا از طریق غوطه وری گل آذین3947168FAمسعودقادریدانشجوی دانشگاه تهرانعلیرضاعباسیعضو هیات علمی دانشگاه تهرانعلی هاتفسلمانیاندانشیار پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست و فناوریJournal Article20120320Drought is by far the most important environmental stress in agriculture and many efforts have been made to improve crop productivity under water-limiting conditions.Minimizing the ‘yield gap’ and increasing yield stability under different stress conditions are of strategic importance in guaranteeing food for the future. Expansin is a protein super family with 4 families in vascular plants. Expansions are cell wall proteins which mediate acidic cell wall loosening through breaking hydrogen bonds between cellulose and glycan matrix. In this study pBIEXPA1 construct was constructed. Arabidopsis plants were transformed by pBIEXPA1 which contained nptII gene and AtEXPA1 gene which was under the control of CaMV35s promoter. Transformation was done by floral dip which did not need any tissue culture and transformed plants were T1. Transformed seedlings were able to remain green on MS medium containing 50 mg/L kanamycin. Transgenic plants were confirmed by PCR. As expected two 753 and 1080bp band were seen in transgenic plants.خشکی مهمترین تنش محیطی است که تاکنون به محصولات کشاورزی خسارت وارد کرده است. تاکنون تلاشهای زیادی در جهت بهبود محصول در شرایط کمبود آب صورت گرفته است.اکسپنسین ها یک ابرخانواده پروتئینی هستند که در گیاهان آوندی از چهار خانواده تشکیل شدهاند. اکسپنسین ها دستهای از پروتئینهای دیواره سلولی هستند که زمینه نرم شدن وابسته به اسیدیته دیواره سلولی از طریق شکستن پیوندهای هیدروژنی بین سلولز و شبکه گلیکان ها را فراهم می کنند. در این تحقیق برای بدست آوردن گیاهان تراریختی که دارای ریشه توسعه یافته تری باشند ابتدااز گیاهآرابیدوپسیس RNA استخراج گردید و پس از ساخت cDNA رشته اول و سپس تکثیر آن از طریق اغازگرهای اختصاصی برای ژن EXPA1در مرحله همسانه سازی، سازه ژنی pBIEXPA1 ساخته شد. از این سازه که حاوی ژن nptII و ژن AtEXPA1 تحت کنترل راه انداز CaMV35s بود در مرحله انتقال ژن جهت تراریختی آرابیدوپسیس استفاده گردید. عمل تراریختی با استفاده از آگروباکتریوم و تکنیک غوطه وری گل آذین صورت گرفت که این تکنیک به مراحل وقت گیر کشت بافت نیاز ندارد و گیاهان بدست آمده از آن نسل T1میباشند. در نتیجه وارد شدن سازه ژنی به برخی از بذرها، گیاهچههای حاصل از آنها بر روی محیط حاوی 50 میلی گرم در لیتر کانامایسین سبز باقی ماندند. تراریختی گیاهان بدست آمده با استفاده از واکنش زنجیرهای پلیمراز در سطح DNA تائید گردید. طبق انتظار دو باند 753 و 1080 جفت بازی در گیاهان تراریخت مشاهده گردیددانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120430A stable and simple transformation of rice (Oryza sativa L. ssp indica) mature embryo using in planta methodترانسفورماسیون پایدار و آسان جنین بالغ برنج (Oryza sativa L. var. indica) با استفاده از روش In planta4962167FAصدیقهنصررمزیدانشگاه گیلانمحمد مهدیسوهانیدانشگاه گیلانسید حسنحسنیعضو هیات علمی دانشگاه گیلانجعفراصغریعضو هیات علمی دانشگاه گیلانJournal Article20120320Agrobacterium-mediated transformation technique is a powerful and essential tool for genetic transformation and transgenic rice plant production. In this study an in planta transformation method was used for rice plants transformation. Therefore, rice seeds were socked for two days and the mature rice embryos was inoculated by means of an Agrobacterium coated needle. An experiment with factorial design including two strains of Agrobacterium tumefaciens (EHA105 and LBA4404) harboring pCAMBIAl105.1R, three levels of Acetosyringone (0, 100 and 200 Mµ), three cultivars of rice (Hashemi, Hasani and Gharib) and two treatments of vacuum and no vacuum operation was carried out in a Completely Randomized Design with three replications. Integration of the transgene into the genome of putative transgenic rice plants were confirmed using resistance of leaf tissues to Hygromycin, the histiochemical GUS assay and PCR with at least three different genes. Accordingly, EHA105 strain and Hashemi cultivar in the presence of 100µM acetosyringone using vacuum in a vir genes induction medium had a significant transformation efficiency (37.46%). The success of transformation was further confirmed by analysis of T1 generation with 21% transgenic.ترانسفورماسیون ژنتیکی برنج با استفاده از اگروباکتریوم (Agrobacterium tumefaciens) رویکردی مطلوب، ضروری و قدرتمند برای انتقال ژن به گیاهان زراعی میباشد. در این پژوهش به منظور ترانسفورماسیون گیاهان برنج از روش in planta استفاده شد. بر این اساس، بذور برنج به مدت دو روز خیسانده شدند و سپس سمت مریستم انتهایی بذر که جنین بالغ برنج وجود دارد در مراحل اولیه جوانهزنی با سوزن آغشته به محلول اگروباکتریوم زخم زنی و تلقیح -شد. آزمایش با دو سویهی اگروباکتریوم ( EHA105و LBA4404) حاوی پلاسمید pCAMBIAl105.1R، سه غلظت استوسیرینگون (Mμ200، 100 و 0)، سه رقم برنج (هاشمی، حسنی و غریب) و دو روش وکیوم و بدون وکیوم به صورت فاکتوریل و در قالب طرح کاملاً تصادفی در سه تکرار انجام شد. کارایی ترانسفورماسیون با استفاده از آزمون مقاومت بافتهای برگی به آنتیبیوتیک هایگرومایسین، آزمون بافت شیمیایی GUS و واکنش PCR با حداقل سه ژن مختلف بررسی شد. در نهایت، سویهی EHA105 در رقم هاشمی، با حضور Mμ100 استوسرینگون همراه با استفاده از وکیوم بالاترین کارایی ترانسفورماسیون (46/37%) را نشان دادند. پایداری ترانسژن در نسل بعد بررسی و بدین منظور 60 گیاه از نسل T1نیز با استفاده از سه تست اشاره شده آزمون و ترانسفورماسیون بودن 21% آنها تأیید شد.دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120430Bioinformatical study of 134th amino acid position role on substrate specificity of dihydroflavonol 4-reductase in anthocyanins biosynthesisبررسی بیوانفورماتیکی نقش جایگاه آمینو اسیدی 134 در اختصاصیت سوبسترای آنزیم دی هیدروفلاونول 4-ریدوکتاز دخیل در بیوسنتز آنتوسیانین ها6371166FAمحمد رضانقویگروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهرانرحیمسروستانیدانشگاه تهران، دانشکده کشاورزی، گروه بیوتکنولوژیJournal Article20120320Plant colors are basically three categories of flavonoid, carotenoid and betalains. Flavonoid and in particular anthocyanins are main colored pigments of flower, fruits and seeds. Biosynthetic pathway leading to biosynthesis of anthocyanin among species is well conserved. One of the key enzymez in anthocyanins biosynthesis pathway is dihydroflavonol 4-reductase which converts dihydroflavonols into their leucoanthocyanidins. In order to investigate the role of 134th amino acid position on substrate specificity determination of dihydroflavonol 4-reductase enzyme, different amino acid sequences of this enzyme have been collected from database and analyzed. Multiple amino acid sequence alignment showed that the amino acid sequence of this enzyme is protected among different species. In two studied species neither of two conserved amino acid including aspargine and aspartic acid at this position was found. Our results clearly indicate that this position cannot alone-responsible for determinate substrate specificity of dihydroflavonol 4-reductase enzyme, and lateral positions of 134th residue maybe are involved in this determining substrate specificity.رنگ گیاهان اساسا ناشی از سه دسته ترکیبات فلاونوئید ها، کاروتنوئید ها و بتالین ها می باشد. فلاونوئید ها و بطور خاص آنتوسیانین ها رنگریزه های اصلی گل ها، میوه ها و بذر هستند. سه آنتوسیانین سیانیدین، پلارگونیدین و دلفینیدین آنتوسیانین های اصلی در گیاهان می باشند. مسیر بیوسنتزی منتهی به آنتوسیانین ها در بین گونه های مختلف بخوبی محافظت شده است. آنزیم دی هیدروفلاونول 4-ریدوکتاز یکی از آنزیم های کلیدی در مسیر بیوسنتزی آنتوسیانین ها است که دی هیدرو فلاونول ها را به لئوکوآنتوسیانیدین های مربوطه تبدیل می کند. برای بررسی نقش جایگاه آمینو اسیدی 134 آنزیم دی هیدروفلاونول 4-ریدوکتاز در تعیین اختصاصیت سوبسترای آنزیم در گونه های مختلف، توالی های آمینو اسیدی این آنزیم را از پایگاه های اطلاعاتی جمع آوری کرده و مورد تجزیه و تحلیل قرار داده ایم. نتایج هم ردیفی چندگانه آمینو اسیدی نشان داد که توالی آمینو اسیدی آنزیم دی هیدروفلاونول 4-ریدوکتاز در بین گونه های مختلف محافظت شده می باشد. در دو گونه از گونه های مورد بررسی هیچکدام از اسید آمینه های محافظت شده آسپارژین و آسپارتیک اسید در این جایگاه وجود نداشته است. نتایج ما به وضوح نشان داده که این جایگاه به تنهایی نمی تواند مسئول تعیین اختصاصیت آنزیم دی هیدروفلاونول 4-ریدوکتاز باشد و جایگاه های آمینو اسیدی مجاور جایگاه 134نیز ممکن است در این تعیین اختصاصیت سهیم باشند.دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120430Immunological and Functional Analysis of Yeast Acetyltransferase Gene (AYT1) in Detoxification of DON in Transformed Tobacco Plantsبررسی ایمنولوژیک و عملکرد استیل ترانسفراز مخمری (AYT1) در سم زدایی مایکوتوکسین دی اکسی نیوالنول در گیاهان توتون تراریخت7385165FAسمیراشهبازیعضو هیات علمی پژوهشکده تحقیقات کشاورزی هسته ایناصرصفاییعضو هیات علمیامیرموسویعضو هیات علمیفروغسنجریانگروه بیوتکنولوژی گیاهی، پژوهشگاه ملی مهندسیژنتیک و زیستفناوری، تهران0000-0002-6826-0648عزیزالهعلیزادهگروه بیماری شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تربیت مدرس، تهرانJournal Article20120320Fusarium Head Blight (FHB), which is caused commonly by Fusarium graminearum, has ability to result significant reduce in yield and also cause indirect losses due to the accumulation of potent mycotoxins (trichothecenes) in harvested grain as secondary metabolites; which are hazardous for human and animal. Trichothecene mycotoxins (such as DON) are potent protein synthesis inhibitors for eukaryotic organisms. Trans expression of AYT1 gene from S. cerevisiae capable of trichothecene 3-O-acetylation and converts DON to a less toxic acetylated form. One of the detoxification and resistance to mycotoxins is acetylation. The main goal of this study was to evaluate transgenic tobacco model plants to deoxynivalenol (DON). In order to detect expression of the AYT1 transgene, we added cMyc tag via PCR-Tagging method and introduced it into the model tobacco plants through Agrobacterium-mediated transformation in an attempt to detoxify DON. After confirmation of integrations of AYT1-cMyc into the tobacco genome by molecular analyses, Immuno-blotting and serological protein studies and trichothecene acetyl transferase activity analyses confirmed the expression of AYT1 and tolerance to 10 ppm concentration of DON in transgenic lines was observed.بیماری بلایت فوزاریومی سنبله گندم که به وسیله قارچ Fusarium graminearum ایجاد می شود, قادر است علاوه بر کاهش چشمگیر عملکرد, خسارت غیر مستقیمی را نیز از طریق تجمع مایکوتوکسین ها (تریکوتسین ها) در دانه های برداشت شده وارد سازد که محصول را برای تغذیه انسان و دام نامناسب می نماید. تریکوتسین ها (مانند دی اکسی نیوالنول یا DON) ممانعت کنندگان سنتز پروتئین در یوکاریوت ها می باشند. محصول ژن AYT1 در مخمر S. cerevisiaeتوانایی 3- O- استیلاسیون تریکوتسین ها را داراست و می تواند DON را به فرم استیله که از سمیت پایین تری برخوردار است تبدیل کند. استیلاسیون یکی از مکانیسم های سم زدایی و ایجاد مقاومت به مایکوتوکسین هاست, در این مطالعه AYT1 (استیل ترانس فراز مخمری) با استفاده از اگروباکتریوم به گیاه مدل توتون انتقال داده شد تا امکان ایجاد مقاومت نسبی به بیماریFHB, مورد بررسی قرار گیرد. به منظور سهولت پیگیری بیان تراژن مذکور اپی توپ c-Myc با استفاده از تکنیک PCR-Tagging به آن افزوده شد. پس از آنالیز های مولکولی و تایید تراریختی, مطالعات ایمنولوژیک با روشهای لکه گذاری و الیزا بر روی لاینهای تراریخت برای بررسی بیانAYT1-cMyc1 انجام شد. علاوه بر آن فعالیت استیل ترانس فرازی تراژن مذکور بر روی DON با تکنیک کروماتوگرافی لایه نازک مشاهده شد. گیاهان تراریخت تحمل نسبی به غلظت 10ppm مایکوتوکسین در ارزیابی های درون شیشه ای نشان دادند.دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-07832220120430A rapid in vitro micropropagation protocol from nodal segments of Rosa hybrid Cv. City of leadsازدیاد درون شیشه ای واریته city of leads رز (Rosa hybrid Cv. City of leads) از طریق کشت جوانه جانبی8795164FAعباسسعیدیمحققنداایروانیمحققامیررضازارع کاریزیمحققJournal Article20120320An efficient in vitro propagation protocol of Rosa hybrid Cv. City of leads by axillary shoot proliferation from nodal segments of mature plants was developed. Explants were cultured on two medium formulations, namely Murashige and Skoog (MS) and Van der salm supplemented with various concentrations of N6- benzyladenine (BA) and α-naphthalene acetic acid (NAA). The best explant establishment (100%) and shoot number (3.4 axillary shoots/ explant) was achieved in Van der salm medium supplemented with 2 mg l-1 BA and 0.05 mg l-1 NAA. The following step was to improve the clonal propagation of this cultivar. Multiple shoots were induced from shoot tips cultured on agar based Vander salm medium containing BA (0, 0.5, 1.25, 1.5 and 1.75 mg l-1) alone or in combination with NAA (0, 0.03, 0.06 and 0.09 mg l-1). The highest number (9.6 shoot per explants) of proliferated shoots was obtained with 1.75 mg l-1 BA plus 0.03 mg l-1 NAA. Elongation of the induced shoots was achieved on Van der salm basal medium containing 0, 0.01, 0.05 and 0.1 mg l-1 BA alone or in combination with 0, 0.03, 0.06 and 0.09 mg l-1 NAA. The best treatment for shoot elongation was obtained with 0.01 mg l-1 BA plus 0.09 mg l-1 NAA. Elongated shoots were excised and transferred into rooting medium containing auxins NAA or IBA. The highest percentage (93.0 %) of root induction was obtained on Van der salm medium supplemented with 0.05 mg l-1 NAA.یک روش تکثیر درون شیشهای کارآمد به منظور تکثیر گونه rosa hybrid واریته city of leads از طریق تکثیر جوانه جانبی بررسی گردید. در ابتدا ریزنمونهها به منظور استقرار بر روی دو محیط کشت MS و van der salm در ترکیب با غلظتهای مختلف هورمونهای BA و NAA کشت گردیدند. بیشترین درصد استقرار ریزنمونهها (100 درصد) و تعداد نوساقهها (4/3 نوساقه در هر ریزنمونه) در محیط van der salm حاوی 2 میلیگرم در لیتر BA همراه با 05/0 میلیگرم در لیتر NAA بدست آمد. در مرحله بعدی به منظور بهبود سرعت تکثیر، نوساقهها بر روی محیط کشت van der salm حاوی غلظتهای 0، 5/0، 25/1، 5/1 و 75/1 میلیگرم در لیتر BA به تنهایی و یا در ترکیب با 0، 03/0، 06/0 و 09/0 میلیگرم در لیتر NAA کشت گردیدند. بیشترین تعداد نوساقهها (6/9 نوساقه در هر ریزنمونه) بر روی محیط حاوی 75/1 میلیگرم در لیترBA همراه با 03/0 میلیگرم در لیتر NAA تولید شد. رشد طولی نوساقهها بر روی محیط van der salm حاوی 0، 10/0، 05/0 و 01/0 میلیگرم در لیتر BA به تنهایی و یا همراه با ، 03/0، 06/0 و 09/0 میلیگرم در لیتر NAA بررسی شد. بهترین تیمار جهت رشد طولی نوساقهها تیمار حاوی 01/0 میلیگرم در لیتر BA در ترکیب با 09/0 میلیگرم در لیتر NAA بود. نوساقهها به منظور ریشهزایی به محیطهای ریشهزایی حاوی هورمونهای IBA و NAA انتقال یافتند. بیشترین درصد ریشهزایی (0/93 درصد) در تیمار هورمونی حاوی 05/0 میلیگرم در لیتر NAA بدست آمد،