دانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-078351220160319Evolution of housekeeping Genes for Gene Expression in Wheat Leaves Infected by Mycosphaerella graminicola with Reverse northern dot blotارزیابی میزان تغییرات بیان ژن های خانه دار در برهمکنش گندم با بیمارگر Mycosphaerella graminicola با روش Reverse northern dot blot1102687FAجلالغلامنژاداستادیار دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه اردکان، اردکان، ایران
(دانشجوی سابق دکتری بیماری شناسی گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه تربیت مدرس)فروغسنجریاناستادیار پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران،0000-0002-6826-0648ابراهیممحمدی گلتپهاستاد بخش بیماری شناسی گیاهی دانشکدۀ کشاورزی دانشگاه تربیت مدرس،تهران، ایرانناصرصفاییدانشیار بخش بیماریشناسی گیاهی دانشکدۀ کشاورزی دانشگاه تربیت مدرس،تهران، ایرانخدیجهرضویاستادیار پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایرانJournal Article20151130As a rule the reference genes used in gene expression analysis have been selected for their housekeeping roles, but the variation observed in most of them is a major obstacle to their effective use. It is widely supported to identify and validate stable reference genes, since no single biological gene is stably expressed between cell types or within cells under different conditions. In this study, suitability of seven wheat housekeeping genes for normalization of mRNA expression in wheat leaves infected by Mycosphaerella graminicola was investigated. Expression level of Actin, Rubisco, Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), Translation Elongation Factor 1α (TEF-1α), α-Tubollin, eukaryotic release factors 1 and 3 (ERF1 and ERF3) genes were examined by reverse northern dot blot method. Expression stabilities of the reference genes were statistically analyzed by Ecxel and SAS softwares. α-Tubolin, TEF-1α and Actin were the three most stable genes whereas the expression of Rubisco and GAPDH had the least stability. The presented comprehensive data on changes in expression of various wheat housekeeping genes in wheat- M. graminicola phatosystem facilitate selection of reference genes for Reverse northern dot blot method.بهطور کلی ژنهای مرجع در تجزیه و تحلیلهای بیان ژن، از بین ژنهای خانهدار انتخاب میشوند، اما تغییرات دیده شده در مقدار بیان مانع اساسی برای استفاده بهینه از آنهاست. از آنجا که بیان هیچ تک ژنی در شرایط مختلف و سلولهای متفاوت ثابت نیست، معرفی و اعتبارسنجی ژنهای مرجع بسیار مهم است. در این تحقیق مناسب بودن هفت ژن خانهدار گندم برای نرمالسازی بیان mRNA در برگ این گیاه در هنگام آلودگی به قارچ Mycosphaerella graminicola مطالعه شده است. به این منظور بیان ژنهای رمزکنندۀ اکتین، روبیسکو، گلیسرآلدهید 3- فسفات دهیدروژناز ، فاکتور طویلسازی ترجمۀ 1 آلفا (TEF 1α)، آلفا-توبولین، فاکتورهای آزادکنندۀ یوکاریوتی 1 و 3 (ERF1 و ERF3) در طول آلودگی توسط روش نوردن بلات معکوس اندازه گیری، و توسط نرم افزارهای اکسل و SAS از لحاظ آماری بررسی شد. بیان ژنهای آلفا-توبولین، TEF 1α و اکتین از بیشترین پایداری برخوردار بود و ژنهای روبیسکو و گلیسرآلدهید 3- فسفات دهیدروژناز کمترین ثبات بیان را داشتند. مطالعه مقایسهای تغییرات در بیان ژنهای مختلف خانهدار گندم در پاتوسیستم گندم - M. graminicola انتخاب ژنهای مرجع را برای روش لکهگذاری نوردنبلات معکوس تسهیل میکند.https://cropbiotech.journals.pnu.ac.ir/article_2687_cc91d957e895120a015824e0b9d31265.pdfدانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-078351220160319Expression of CYP genes involved in sesamin biosynthesis pathway in different varieties of sesame seeds (Sesamum indicum L.)بیان ژنهای خانواده CYP دخیل در سنتز سزامین در دانه ارقام مختلف کنجد (Sesamum indicum L)11232688FAآزادهریانیکارشناس ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین المللی امام خمینی(ره)، قزوین، ایرانفاطمهدهقان نیریاستادیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین المللی امام خمینی(ره)، قزوین، ایرانJournal Article20151121Sesame (Sesamum indicum L.) is one of the oldest oilseed crops that has been a main food source providing beneficial nutritional outcomes to human health due to its high contents of antioxidants and secondary metabolites. The importance of sesame arises from presence of antioxidant sesamin. Over recent decades, due to being used in cancer cases, there have been numerous efforts aimed at better understanding of the genes underlying sesamin biosynthesis and increasing their expression. In this research, expression levels of the key genes in sesamin biosynthesis pathway including CYP81Q1, CYP81Q2, CYP81Q3 and C3H genes were measured in 10 sesame cultivars seeds (Yekta, early Palestinian, Naz tak shakheh, Naz chand shakheh, Oltan, Jiroft, Dashtestan 5, Dashtestan 2, Varamin and Karaj 1) by QRT-PCR technique and 18S rRNA gene as reference gene. Our findings showed that the level of CYP81Q1 gene expression was low in Early Palestinian that has low sesamin content. Therefore, this might not be considered as a qualitatively desired oil cultivar compared to others, whereas Yekta had the highest level of CYP81Q1 expression the best varieties for oil production both qualitatively and quantitatively. The highest expression level of CYP81Q2 was observed in Naz chand shakheh, while the lowest CYP81Q2 expression was found in Early Palestinian. Karaj1, Yekta and Dashtestan 5 showed the highest whereas Oltan had the lowest expression level of C3H. Karaj 1, Yekta and Dashtestan 5 were relatively from the late mature group that was reported to have higher contents of oil and sesamin than early ones.کنجد (L. Sesamum indicum) با داشتن مقادیر زیاد آنتیاکسیدان و متابولیت ثانویه منبع تغذیهای مهمی در تامین و حفظ سلامت انسان است. اهمیت ویژه دانه کنجد بهدلیل وجود آنتیاکسیدان طبیعی مهمی به نام سزامین است. بهدلیل کاربرد این آنتیاکسیدانت در پیشگیری از بروز بیماریها بهخصوص سرطانها تلاشهای زیادی در راستای شناخت ییشتر ژنهای دخیل در مسیر بیوسنتز این ماده و افزایش سطح بیان ژنهای رمز کننده آنزیمهای مربوطه انجام شده است. در این مطالعه سطح بیان ژنهای کلیدیCYP81Q1 ،CYP81Q2 ،CYP81Q3 و C3H دخیل در بیوسنتز سزامین در دانه 10 رقم کنجد شامل رقم یکتا، زودرس فلسطینی، ناز تک شاخه، ناز چند شاخه، اولتان، جیرفت، دشتستان 5، دشتستان 2، ورامین و کرج 1 با روش QRT-PCR و ژن خانهدار 18S rRNA بررسی شد. براساس نتایج حاصله سطح بیان ژن CYP81Q1 در رقم زودرس فلسطینی پایین بوده و بعلت پایین بودن مقدار سزامین آن، این رقم را نمیتوان در مقایسه با سایر ارقام بهعنوان یک رقم روغنی مطلوب از نظر کیفییت معرفی کرد. رقم یکتا در بین ارقام بیشترین سطح بیان ژن CYP81Q1 را داشت و یکی از بهترین ارقام در تولید روغن از نظر کیفی و کمی است. ژن CYP81Q2 در رقم ناز چند شاخه بیشترین و ژن CYP81Q3 در رقم زودرس فلسطینی کمترین سطح بیان را داشتند. همچنین ارقام کرج 1، یکتا و دشتستان 5 بیشترین سطح بیان ژن C3H و اولتان کمترین سطح بیان را داشتند. ارقام کرج 1، یکتا و دشتستان 5 جزء ارقام تقریباً دیررس هستند. ارقام دیررس دارای روغن بیشتر و محتوای سزامین بالاتری در مقایسه با ارقام زودرس هستند.https://cropbiotech.journals.pnu.ac.ir/article_2688_605e04530417883abaa51ed28e36163c.pdfدانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-078351220160319In silico characterization and expression analysis of SnRK2 family in barleyبررسی بیوانفورماتیکی و بیان خانواده ژنی SnRK2 در گیاه جو25382702FAیاسرپناهی فکورکارشناسیارشد، گروه زیست شناسی سیستم ها، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایرانزهرا ساداتشبراستادیار گروه زیست شناسی سیستم ها، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی کرج، ایران0000-0002-7011-5415احسانپورعابدکارشناسیارشد، گروه زیست شناسی سیستم ها، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایرانفرزانقانع گلمحمدیکارشناسیارشد، گروه زیست شناسی سیستم ها، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایرانسید مرتضیرضویکارشناسیارشد، گروه زیست شناسی سیستم ها، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایرانJournal Article20151222Abiotic stresses are among major factors limiting crop yields, and SnRK2 protein kinases are one of the key regulators of plant response to abiotic stresses. Due to the economic importance, cultivation area, and tolerance of barley to the abiotic stresses, identification and characterization of SnRK2 family members in barley is performed in present research. SnRK2 conserved sequences were used as a query for tBLASTn analysis in different databases such as NCBI and international barley sequencing consortium against all of the reported barley sequences. As a result, 10 members were identified (HvSnRK2.1 to HvSnRK2.10) which 8 of them were not yet reported. These HvSnRK2 members were aligned with AtSnRK2s and OsSnRK2s and a phylogenetic tree was constructed. Detection of chromosomal localization, promoter analysis and gene structure determination was also performed. Half of the family members were located on chromosome 2 and the rest on chromosomes 1, 4, 5 and 6. Number of introns in the gene family members varied from 0 to 8. Totally, 19 sorts of cis elements including abiotic stress responsive elements were found in HvSnRK2s promoter sequences. Expression pattern of the family members were evaluated in different tissues, treatments and genotypes, based on the microarray data. Expression of HvSnRK2.6 was up-regulated by drought, salt and cold stresses implementing its important role in signal transduction of these stresses and tolerance induction to them. It is expected that this gene could be used in plant manipulation and breeding programs aimed for tolerance enhancement to abiotic stresses especially drought.تنشهای غیرزیستی از مهمترین عوامل محدود کنندهی عملکرد گیاهان زراعی و پروتئین کینازهای SnRK2 از تنظیمکنندههای کلیدی پاسخ گیاهان به تنشهای غیرزیستی میباشند. با توجه به اهمیت اقتصادی، سطح زیر کشت و تحمل گیاه جو به تنشهای غیرزیستی، در این تحقیق اعضای خانوادهی SnRK2 در گیاه جو شناسایی و مورد بررسی قرار گرفتهاند. بههمین منظور توالیهای حفظ شده خانواده SnRK2 در پایگاههای اطلاعاتی مختلف همچون NCBI و پروژه ژنوم جو، با ابزار tBLASTn در بین توالیهای ثبت شده برای گیاه جو جستجو شدند. در نتیجه 10 عضو یافت شدند HvSnRK2.1) تا HvSnRK2.10) که 8 عضو آن تاکنون گزارش نشده بودند. اعضای خانوادهی SnRK2 جو با اعضای این خانواده در آرابیدوپسیس و برنج همردیف و درخت فیلوژنتیک رسم شد. تعیین جایگاه کروموزومی، آنالیز پروموتر و تعریف ساختار ژنها انجام شد و الگوی بیان هر ژن در اندامها، تیمارها و ارقام مختلف بر اساس دادههای ریزآرایه مورد بررسی قرار گرفت. نیمی از اعضای این خانواده روی کروموزوم 2 و بقیه روی کروموزومهای 1، 4، 5 و 6 قرار داشتند. تعداد اینترون در اعضای این خانواده از صفر تا 8 متغیر بود. 19 نوع عامل سیس شامل عوامل مؤثر در پاسخ به تنشهای غیرزیستی، بر روی پروموتر اعضای خانواده ژنی HvSnRK2 شناخته شد. بیان ژن HvSnRK2.6 توسط خشکی، شوری و سرما القا شده و بهنظر میرسد در انتقال پیام این تنشها و ایجاد تحمل به آنها نقش مهمی ایفا کند. امید است بتوان از این ژن برای اصلاح و دستورزی گیاهان در جهت تحمل به تنشهای غیرزیستی بهویژه خشکی بهره برد.https://cropbiotech.journals.pnu.ac.ir/article_2702_dedea8f35c2578ed0821196d7f8eb911.pdfدانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-078351220160318Genetic diversity of sunflower genotypes (Helianthus annuus L.) using TRAP markersبررسی تنوع ژنتیکی ژنوتیپهایی از آفتابگردان (Helianthus annuus L.) با استفاده از نشانگر مولکولی TRAP39532703FAحسینزینل زاده تبریزیدانش آموخته دکتری اصلاح نباتات و پژوهشگر جهاد دانشگاهی همدانکامیلحالیل اوغلواستاد گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی، دانشگاه آتاتورک ترکیهاحمدرزبان حقیقیدانش آموخته دکترای بیولوژی مولکولی و پژوهشگر مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان آذربایجان شرقی، تبریزJournal Article20151119In order to investigate genetic diversity of sunflower genotypes, TRAP markers were used with six fixed and arbitrary primers. Nineteen primer combinations generated a total of 116 bands in which 109 of them were polymorphic. Restorer inbred lines with a mean of 22.76 polymorphic bands had the highest polymorphic loci (84.48 %), and Iranian hybrids with a mean of 2.97 polymorphic bands had the lowest polymorphic loci (40.52 %). Maximum and minimum genetic distances were between restorer lines and Iranian hybrids (0.151) and foreign hybrids and open pollinated cultivars (0.064), respectively. Maximum genetic similarity was between restorer and CMS lines (0.066). AMOVA analysis revealed that 87 % of total variance was within groups, and 13 % was between groups. Using UPGMA method of clustering and principal coordinate analysis, three distinctive groups were identified. Minimum similarity coefficient (0.472) was observed between R42 and CMS328 inbred lines. Results showed that TRAP marker was useful in genetic diversity estimation of sunflower genotypes. Higher similarity coefficient (0.755) for the studied genotypes indicated a narrow genetic base suggesting increasing genetic diversity of sunflower germplasm and selection of high diversity of new inbred lines in the future sunflower breeding programs.بهمنظور بررسی تنوع ژنتیکی 68 ژنوتیپ آفتابگردان از نشانگر جدید مولکولی TRAP با 6 آغازگر ثابت و 6 آغازگر تصادفی و 19 ترکیب آغازگری استفاده شد. تمام ترکیبهای آغازگری چند شکل بودند که در مجموع 116 باند ایجاد کردند که 109 تای آنها چندشکل بود. در این تحقیق لاینهای برگرداننده باروری با میانگین 76/22 باند چندشکل، بیشترین جایگاه چند شکل (48/84 درصد) و هیبریدهای ایرانی با میانگین 97/2 باند چندشکل، کمترین جایگاه چند شکل (52/40 درصد) را بهخود اختصاص دادند. بیشترین فاصله ژنتیکی بین گروه برگرداننده باروری و هیبریدهای ایرانی (151/0) و کمترین فاصله بین هیبریدهای خارجی و ارقام آزاد گردهافشان خارجی (064/0) بود. گروه لاینهای برگرداننده باروری و مادری کمترین فاصله ژنتیکی را داشتند (066/0). بر اساس تجزیه واریانس مولکولی، 87 درصد از تنوع ژنتیکی ناشی از تنوع درون گروهها و 13 درصد مربوط به تنوع بین گروهها بود. در هر دو تجزیه خوشهای و هماهنگکنندههای اصلی، گروه لاینهای برگرداننده باروری و مادری در یک گروه، هیبریدها و ارقام خارجی در گروه مشابه و هیبریدهای ایرانی در گروه مجزا قرار گرفتند. بر اساس تجزیه خوشهای کلی، پایینترین ضریب تشابه (472/0) بین لاینهای R42 و CMS328 محاسبه شد. نتایج نشان داد که نشانگر TRAP کارایی بسیار خوبی در گروهبندی و محاسبه تنوع ژنتیکی آفتابگردان دارد. با وجود تنوع ژنتیکی میان گروهها و ژنوتیپها، بهدلیل ضریب تشابه ژنتیکی بالای ژنوتیپها (755/0)، تنوع ژنتیکی ژنوتیپهای مورد بررسی پایین برآورد شد و بدینوسیله افزایش تنوع ژنتیکی ژرپلاسم آفتابگردان و انتخاب لاینهای اینبرد والدینی جدید با تنوع بالا در برنامههای آینده اصلاح آفتابگردان پیشنهاد میشود.https://cropbiotech.journals.pnu.ac.ir/article_2703_a4acccd7324acfa602d27b9a689d4e91.pdfدانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-078351220160318Direct extraction and purification of soil microbial total DNA and molecular detection of soil-borne pathogen Fusarium oxysporum causal agent of tomato vascular wiltاستخراج مستقیم و خالص سازی DNA کل از جامعه میکروبی خاک و ردیابی مولکولی فرمهای اختصاصی بیمارگر خاکزاد Fusarium oxysporum عامل پژمردگی آوندی گوجه فرنگی55662704FAمحمد علیابراهیمیدانشیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه پیام نور، تهرانشیواالهیار پارساکارشناسیارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه پیام نور، تهرانسعیدهپیرایشدکتری بیماریشناسی گیاهی، گروه بیماریشناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهرانJournal Article20151214Molecular analysis is often required in many genome extracted from various tissues. In much molecular analysis of genetic studies of microbial communities, often require direct extraction of DNA from soil. In this study, after careful study of the various methods proposed three methods (chemical enzyme), (chemi-mechanical) and (chemical mechanical enzymatic), in order to extract DNA from soil, a separate project was studied to most identify different methods of extraction. The comparison between the same conditions, a significant difference in the DNA product of the average concentration of 2/32 to 6/1 ng per µl DNA was diluted and also on the basis of information obtained from Nanodrop and electrophoresis device and review of the DNA extracted protein product DNA, methods (chemical, mechanical, enzymatic) better performance at higher concentrations, remove humic acid proteins and other contaminants was superior to other methods. The molecular detection of pathogens that extraction is important applications; the aim of this study is molecular detection of pathogen Fusarium oxysporum f. sp lycopersici and Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici of soil microbial community by molecular techniques to identify the special primer evaluated. Molecular detection results showed that there is tomato Fusarium infection in soil samples S1.دستیابی به اطلاعات مولکولی و ژنتیکی توانسته است بسیاری از چالشهای علوم زیستی را در جنبههای مختلف حل کند. روشهای کاربردی بسیاری جهت استخراج DNA از بافتهای جانوری و گیاهی و سایر موجودات زنده شناسایی و معرفی شده است.، در بسیاری مطالعات ژنتیکی در جوامع میکروبی، اغلب نیاز به استخراج مستقیم DNA از خاک است. در این تحقیق پس از مطالعه دقیق روشهای مختلف پیشنهادی، سه روش (شیمیایی- آنزیمی)، (شیمیایی- مکانیکی) و (شیمیایی- آنزیمی- مکانیکی)، جهت استخراج DNA ازجامعه میکروبی خاک، جداگانه طرح و مورد مطالعه و بررسی قرار گرفت تا مناسبترین روش، شناسایی و معرفی شود. مقایسه بین روشهای مختلف در شرایط برابر و 5 تکرار برای هر روش، در محصول DNA اختلاف مشخصی را از میانگین غلظت32/2 تا 1/6 نانوگرم بر میکرولیتر DNA رقیق شده، نشان داد و همچنین بر اساس اطلاعات بدست آمده از دستگاه نانودراپ و الکتروفورز و بررسی نسبت DNA به پروتئین در محصول استخراج DNA، روش (شیمیایی- آنزیمی-مکانیکی) با کارایی بهتر در غلظت بیشتر، حذف هیومیکاسید، پروتئین و سایر آلودگیها به سایر روشها برتری داشت. در این تحقیق همچنین ردیابی مولکولی بیمارگرها به عنوان یکی از کاربردهای مهم استخراج مطرح و فرم اختصاصی Fusarium oxysporum f. sp lycopersici و Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici عامل پژمردگی آوندی در گوجهفرنگی از جامعه میکروبی خاک به وسیله تکنیکهای مولکولی با آغازگر اختصاصی uni شناسایی شد. نتایج ردیابی مولکولی، حضور فرمهای اختصاصی این بیمارگر را در نمونه خاک S1 با 5 تکرار تائید مینماید.https://cropbiotech.journals.pnu.ac.ir/article_2704_0a2b35928d3ad7175f4a0e80acd3855f.pdfدانشگاه پیام نورفصلنامه علمی زیست فناوری گیاهان زراعی2252-078351220160220Overexpression of Strictosidine Synthase Like-6 Gene in Arabidopsis thalianaفرابیان ژن شبه استریکتوسیدین سینتاز-6 در گیاه Arabidopsis thliana67782734FAامینعابدیدانشجوی دکترای بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه گیلان، رشت، ایرانمحمد مهدیسوهانیاستادیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه گیلان، رشت، ایرانرضاشیرزادیاناستادیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه گیلان، رشت، ایرانJournal Article20151130The monoterpenoids comprise a family of structurally and pharmaceutically diverse alkaloids. Strictosidine synthase is a key enzyme in monoterpenoid indole alkaloid biosynthesis pathway. In spite of the apparent lack of complex alkaloids in Arabidopsis, a gene family called Strictosidine synthase like (SSL) has been found in the genome. SSL6, a member of SSL family, has been induced significantly by various stresses and signaling molecules. An overexpressed mutant is a powerful tool for functional characterization of an unknown gene. In view of that, SSL6 overexpressed mutant have been generated in order to study the possible role of the gene in Arabidopsis defense against biotic and abiotic stresses. The open reading frame from SSL6 was amplified and cloned into intermediate pJET vector before subcloning into pPZPY122 plant vector. Plant transformation was made by floral dip method using Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 (PMP90). The putative transgenic plants were isolated on selective MS medium containing gentamycin. Transgene integration was further analyzed by PCR using SSL6 and gentamycin resistance gene specific primers. The transcription level of SSL6 in the T2 plants was measured using q-PCR and indicated an overexpression in transgenic compared to wild type Col-0 plants. Segregation ratio of plants in T2 and T3 generation on selection medium proved that some of the genotypes contain single T-DNA insert. The SSL6 Expression level in response to salt stress was measured in Col-0 and indicated an up-regulation of the gene 3, 6 and 12 hrs after treatment.استریکتوسیدین سینتاز یک آنزیم کلیدی مسییر بیوسنتز ایندول الکالوئیدهای مونوترپنی میباشد. آرابیدوپسیس قادر به تولید ترکیبات آلکالوئیدی نیست اما، ژنهایی مشابه استریکتوسیدین سینتاز در آن شناسایی شده است. ژن SSL6 از اعضاء خانواده ژنی شبه استریکتوسیدین سینتاز آرابیدوپسیس میباشد که در این تحقیق پاسخ ژن آن به تیمار شوری بصورت کمی بررسی و سپس در گیاه آرابیدوپسیس فرابیان شد. بمنظور تولید موتانت فرابیان ژن SSL6 RNA کل استخراج و رشته اول cDNA با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن ساخته شد. کلون سازی ابتدایی در ناقل pJET انجام و متعاقبا به سازه فرابیانی گیاهی (pPZPY:SSL6) منتقل شد. در ترانسفورماسیون آرابیدوپسیس از اگروباکتریوم نژاد GV3101(PMP90) و تکنیک غوطهوری گلآذین استفاده شد. آنالیز گیاهان تراریخت احتمالی در ابتدا با کشت بذرهای حاصل از گیاهان تلقیح شده بر روی محیط گزینشی حاوی آنتی بیوتیک جنتامایسین و گزینش گیاهچههای مقاوم انجام شد. در ادامه گیاهان تراریخت احتمالی در طی واکنش PCR با پرایمرهای اختصاصی ژن SSL6 با تولید الگوهای باندی متفاوت در الکتروفورز در مقایسه با گیاهان وحشی و همچنین پرایمرهای اختصاصی ژن مارکر جنتامایسین جداسازی شدند. میزان افزایش بیان ژن انتقال یافته نسبت به گیاه مادری با واکنش Real-Time PCR بر روی گیاهان نسل T2 انجام و نتایج نشان داد افزایش بیان ژن SSL6 در گیاهان تراریخته به طور قابل ملاحظهای بالاتر از گیاه مادری بوده است. تعدادی لاین تراریخت حاوی یک نسخه تراژن از طریق تفرق صفت مقاومت به آنتیبیوتیک جنتامایسین در محیط کشت انتخابی در نسل T2 و T3 انتخاب شدند. بررسی کمی بیان ژن SSL6 در گیاهان وحشی Col-0 نیز نشان داد که تنش شوری موجب افزایش معنیدار بیان ژن، شش ساعت پس از اعمال تیمار شد.https://cropbiotech.journals.pnu.ac.ir/article_2734_ff7d1edcd360a66f13aee03e89b93d89.pdf