نوع مقاله : علمی پژوهشی
نویسندگان
1 دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی گیاهی، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران
2 دانشیار دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران
3 استادیار گروه زیستفراوردهای گیاهی، پژوهشگاه ملی و مهندسی ژنتیک و زیستفناوری، تهران، ایران
4 استاد گروه زیست فراوردهای گیاهی، پژوهشگاه ملی و مهندسی ژنتیک و زیستفناوری، تهران،ایران
5 استادیار گروه زیستفناوری مولکولی گیاهی، پژوهشگاه ملی و مهندسی ژنتیک و زیستفناوری، تهران، ایران
چکیده
ناقلین دوتایی مرسوم مبتنی بر pBI121 که هنوز به طور گستردهای در انتقال ژن به گیاه بهوسیله آگروباکتریوم استفاده میشوند، بهعلت عدم کارآیی گزینشگر کانامایسین، در برخی از گیاهان تکلپهای قابل استفاده نیستند در حالی که مقاومت به هیگرومایسین یک نشانگر گزینشی پرکاربرد و مهم در تراریختی برخی گیاهان بهویژه تکلپهایها به شمار میرود. از این رو در مطالعه حاضر، بهبود ناقل pBI121 برای تراریختی گیاهان تکلپهای مورد نظر قرار گرفت. به این منظور، ژن مقاومت به هیگرومایسین به همراه خاتمهدهنده 35S از پلاسمید p6-ubi-rnai بهوسیله آنزیمهای برشی SmaІ و NotІ، جداسازی و در ناقل حدواسط pBlueScript همسانهسازی شد. در ادامه، با استفاده از آنزیمهای HindIII و SmaI، پیشبر CaMV 35S از بدنه حامل pBI121 جداسازی و در بالادست این ژن در ناقل pBlueScript قرار داده شد. با استفاده از آنزیمهای HindIII و Eco53KI، کاست کامل ژن مقاومت به هیگرومایسین جایگزین کاست ژن مقاومت به کانامایسین (که با استفاده از آنزیمهای HindIII و MssI حذف شده بود) در ناقل pBI121 شد. صحت ساخت ناقل جدید توسط روش PCR، بررسی الگوی هضم آنزیمی و توالییابی تأیید شد. با توجه به محبوبیت سری ناقلین مبتنی بر pBI121 نسبت به سایر ناقلین موجود و آشنایی محققین با نحوه دستورزی آنها، کارایی ناقل معرفی شده در این مطالعه میتواند در پژوهشهای انتقال ژن به گیاهان تکلپه مورد بررسی قرار گیرد.
کلیدواژهها
موضوعات
عنوان مقاله [English]
Designing and construction of a plant expression vector containing the hygromycin antibiotic resistance marker gene
نویسندگان [English]
- Ali Saeedpour 1
- Soodabeh Jahanbakhsh 2
- Tahmineh Lohrasebi 3
- Kasra Esfahani 3
- Ali Hatef Salmanian 4
- Khadijeh Razavi 5
1 Ph.D. Student, Faculty of Agricultural Sciences & Natural Resources, University of Mohaghegh Ardabili, Ardabil, Iran.
2 Associate Professor, Faculty of Agricultural Sciences & Natural Resources, University of Mohaghegh Ardabili, Ardabil, Iran.
3 Assistant Professor, Department of Plant Bioproducts, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran.
4 Professor, Department of Plant Bioproducts, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran
5 Assistant Professor, Department of Plant Molecular Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran.
چکیده [English]
Conventional pBI121-based binary vectors are widely used in transformation of higher plants mediated by Agrobacterium but they are useless in transformation of some monocots because of inefficiency of kanamycin in selection, while, hygromycin resistance gene is an important selectable marker that usually used in transformation of several plants, especially monocots. The aim of this study was to improve the pBI121 vector for transformation of monocot plants. For this purpose, the hygromycin resistance gene with the 35S terminator were isolated from p6-ubi-rnai plasmid and cloned into pBlueScript intermediate vector via SmaІ and NotI restriction enzyme digestion. The CaMV 35 promoter was isolated from pBI121 vector by using SmaI and HindIII enzymes and cloned upstream of the gene. By using HindIII and Eco53KI enzymes, the complete hygromycin resistance gene cassette was replaced the kanamycin resistance gene cassette (which digested by HindIII and MssI) of pBI121 vector. Construction of this vector was confirmed by PCR method, digestion pattern analysis, and sequencing. Due to the popularity of pBI121-based vectors than other binary vectors and the researchers' familiarity with their manipulation, the vector which is introduced in this study could be used in gene transfer studies of monocot plants.
کلیدواژهها [English]
- Agrobacterium
- Monocots
- Hygromycin
- pBI121
- Binary Vector
)